ВЛИЯНИЕ ПРОСПИДИНА И СПИРОБРОМИНА НА БЛАСТТРАНСФОРМАЦИЮ ЛИМФОЦИТОВ

Я. С. Богомолова, В. С. Сускова, Л, М. Муховатова

Противоопухолевые препараты проспидин и спиробромин, синтезированные во ВНИХФИ, имеют сходную структуру, малотоксичны, обладают выраженной противоопухолевой активностью. Влияние препаратов на иммунную систему организма изучено недостаточно. В то же время известно, что большинство применяемых в клинике противоопухолевых вещаете угнетает иммунный ответ, что приводит к инфекционным осложнениям у больных со злокачественными новообразованиями [1, 2, З].

В связи с этим целью .настоящего 'исследования явилось сравнительное изучение влияния проспидина и спиробромина на функциональную активность лимфоцитов в тесте клеточного иммунитета — реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТ), индуцированной фитогемагглютинином (ФГА). Для поставки РБТ использовали гепаринизированную донорскую кровь. Мононуклеаркые клетки выделяли центрифугированием в фиколл-верографиновом градиенте стандартным методом [4]. Содержание лимфоцитов составляло 80%, количество жизнеспособных клеток, определенных методом окрашивания трипановым синим, — 90% и выше. Клетки в концентрации 0,5х10⁶ культивировали в 1 мл среды 199 с добавлением антибиотиков, 10%-ной сыворотки 4-й группы и 10 мкг ФГА-Р фирмы «Difco»—по пять параллельных культур на каждую концентрацию препаратов. Испытуемые вещества вносили в культуру в разные сроки по отношению к митогену в концентрации 50; 500 и 1000 мкг/мл. Цитотоксический эффект препаратов оценивали по количеству жизнеспособных клеток в 72-часовой культуре. За 4 ч до окончания культивирования в каждую пробирку добавляли 1 мкКи  ³Н-тимидина (удельная радиоактивность 17,6 Ки/ммоль). Через 72 ч от начала культивирования каждую пробу осаждали на миллипоровые фильтры и отмывали холодным физиологическим раствором и 10%-кым раствором трихлоруксусной кислоты. Радиоактивность полученных кислотонерастворимых фракции лимфоцитов подсчитывали на жидкостном сцинтилляционном счетчике «Mark II». Результаты выражали в процентах включения радиоактивной метки опытными культурами по отношению к контрольным стимулированным культурам. Опыты повторялись трижды.

Полученные результаты представлены в табл. 1.

Таблица 1

Зависимость РБТ от концентрации препаратов

* Жизнеспособность клеток оценивали через 72 ч по окраске трипановым синим.

Из данных таблицы видно, что при добавления в культуру 50 мкг/мл проспидина одновременно с внесением ФГА включение ³Н-тимидина в ДНК снижено более чем в 2 раза (до 43,2°/о по отношению к контролю). Увеличение концентрации препарата на порядок (до 500 мкг/мл) снижало включение метки в три раза; 1000 мкг/мл подавляло синтез ДНК в четыре раза. При этом цитотоксический эффект проспидина практически отсутствовал: при всех концентрациях количество живых клеток в культуре составляло 85—80% при 87—90% в контроле.

Ингибирующий эффект спиробромина в концентрации 50 мкг/мл выражен меньше, чем у проспидина, однако с увеличением концентрации до 500 и 1000 мкг/мл подавление РБТ нарастает и превышает в два раза эффект проспидина. Цитотоксическое действие препаратов в исследованных концентрациях также отсутствует (процентное содержание живых клеток после 72 ч культивирования в опытных культурах практически такое же, как и в контроле).

При изучении интенсивности РБТ в зависимости от сроков введения но отношению к митогену ФГА (табл. 2) препараты вносились в культуру в концентрации 50 мкг/мл за 1 ч до ФГА, одновременно с ним и через 1 ч после него. Наиболее выраженное угнетение РБТ наблюдалось при внесении обоих препаратов одновременно с ФГА или после него.

Таблица 2

Зависимость интенсивности РБТ от сроков введения препаратов в культуру (М±т)

Полученные результаты показали, что проспидин и спиробромин угнетают функциональную активность лимфоцитов человека в культуре, причем степень угнетения имеет дозовую зависимость. В концентрации 50 мкг/мл проспидин сильнее подавляет бласттрансформацию лимфоцитов, чем спиробромин. Эта доза проспидина вызывает 50%-ное угнетение РБТ, спиробромин угнетает РБТ на 20%. С увеличением концентрации ингибирующий эффект проспидина возрастает постепенно, тогда как действие спиробромина усиливается резко и превышает эффект проспидина. При этом эффект препаратов не определяется цитотоксическим воздействием на лимфоциты и зависит от времени введения по отношению к митогену. Наибольшее угнетение РБТ наблюдается при введении одновременно с ФГА или после него, что свидетельствует о преимущественном действии исследованных веществ на стадии распознавания чужеродного антигена лимфоидными клетками.

Таким образом, в результате проведенных исследований выявлено, что проспидин и спиробромин, как многие известные противоопухолевые лекарственные средства, оказывают угнетающее действие на клеточный иммунитет, однако степень выраженности их ингибирующего эффекта различна и зависит от концентрации препаратов и сроков их введения.

Выявленные различая следует учитывать как при разработке оптимальных режимов применения, так и для оценки влияния исследованных препаратов на иммунный статус организма при клиническом их использовании.