СРАВНЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ АНТИМИТОТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ПРОСПИДИНА, СПИРОБРОМИНА, ФОПУРИНА И ФОТРИНА НА МОДЕЛИ РЕГЕНЕРИРУЮЩЕЙ ПЕЧЕНИ МЫШЕИ

А. С. Соколова, В. М. Фактор, И. В. Урываева

Рациональное клиническое применение цитостатичесюих противоопухолевых препаратов может быть обеспечено пониманием всех сторон механизма их влияния на клетку, в том числе — эффективности воздействия на отдельные периоды клеточного цикла. С данной точки зрения нами изучено четыре противоопухолевых препарата, созданных во ВНИХФИ, — проспидин, слиробромин, фопурин и фотрин. Известно, что блокирование перехода клеток по циклу является одной из причин вызываемой химиопрепаратамя ингибиции опухолевого роста и тип этого блокирования, как и сравнительная чувствительность клеток к препарату в разных фазах цикла, являются важной характеристикой цитостатического эффекта [1, 2]. В качестве модели изучения воздействия указанных препаратов на прохождение клеток по циклу выбрана кинетика пролиферации гепатоцитов регенерирующей печени мышей, получавших инъекции препарата через 30—32 ч после регенераторного стимула.

Материал и методы исследования. Работа проведена на мышах линии СВА/С57ВL6 средней массой 20—23 г. Операцию частичной гепатэктомии проводили по стандартной методике Хиггцнса-Андерсона под легким эфирным наркозом. Проспидин (25 мышей), спиробромян (39 мышей), фопурин (27 мышей), фотрин (25 мышей) или изотонический раствор хлорида натрия (17 мышей) вводили внутрибрюшинно через 30—32 ч после частичной гепатэктомии в период максимального вступления гепатоцитов в S период. Препараты применяла в максимально переносимых для однократного введения дозах: проспидин — 900, спиробромин—1000, фопурин—125 и фотрин—30 (мг/кг). Через 1 ч после введения препаратов или изотонического раствора хлорида натрия (0,3 мл) внутрибрюшинно вводили  ³Н-тимидин со специфической активностью 11 Ки/ммоль в дозе 1 мКи/г. Кусочки печени фиксировали каждые 1 — 2 ч в течение периода от 1 до 42 ч после инъекции изотопа. На срезах печени просматривали митозы на 5 — 10 тыс. ядер для определения митотического индекса, а также подсчитывали процент меченых митозов не менее чем из 50 митозов в препарате.

Результаты и их обсуждение. У контрольных мышей волна основной пролиферации после удаления 2/3 печени ограничена обычно 24 — 72 ч. Митотический индекс в нашем опыте колебался у контрольных мышей между 1,1 и 6,25%. Введение проспидина через 32 ч после операции не влияло на последующую митотическую активность в регенерирующей печени. При воздействии спиробромином митотическая активность сохранялась на контрольном уровне до 38 ч после операции, затем снижалась и продолжала находиться на низком уровне (0,3 — 1,1%) до окончания периода наблюдения (78 ч после частичной гепатэктомии). При введении фопурина снижение митотической активности в регенерирующей печени отмечалось начиная с 40 ч после операции (до 1,2 при 6,25% в контроле), к 64 — 71 ч митотический индекс несколько возрастал (до 2,2 — 2,8%). Введение фотрина через 30—32 ч после операции частичной гепатэктомии приводило к блокированию митотической активности в регенерирующей печени через 38 — 71 ч после резекции 2/3 органа. При этом у большей части животных через 52 — 71 ч после операции митозы отсутствовали и лишь у отдельных мышей встречались единичные митозы.

Анализ восходящей части кривой меченых митозов (рис.), отражающей характер перехода меченых клеток из периода G₂ в митоз, показывает, что скорость накопления меченых митозов у контрольных мышей и животных, получавших проспидин (2) и спиробромин (3), идентична в течение первых 8 ч. Это означает, что клетки в периоде G₂ не чувствительны к проспидину и спиробромину и способны завершить клеточный цикл. Напротив, восходящая часть кривой меченых митозов у животных, получавших фопурин (4) и фотрин (5), заметно отстает от контрольной (1), что свидетельствует о задержке прохождения гепатоцитов по фазе G₂.

В дальнейшем кривые меченых митозов у мышей, получавших проспидин и спиробромин, расходятся. Нисходящая часть кривой у обработанных проспидином мышей проходит лишь незначительно (Р<0,01) выше контрольной, в то время как кривая меченых митозов у мышей,  получавших спиробромин, имеет плато вплоть до 20 ч (52 ч после операции) и резко, снижается к 32-му часу после введения, что свидетельствует о задержке в  S периоде.

При введении фопурина после менее продолжительного плато, чем у обработанных спиробромином мышей (до 14 ч), кривая меченых митозов снижается к 26-му часу, однако в течение 38 ч в препарате печени обнаруживаются .меченые митозы (70 ч после частичной гепатэктомии). Таким образом, фопурин оказывает ингибирующее действие на клетки в G₂ и S периодах а также, возможно, и на клетки, находящиеся в момент воздействия в предcинтетической фазе цикла.

В случае введения фотрина процент меченых митозов не снижается после 8 - 12 ч. С этого времени происходит резкое уменьшение митотической активности до практически полного отсутствия митозов вплоть до 24 ч. Стопроцентное мечение единичных митозов в эти сроки говорит о том, что клетки из G₁ периода длительное время не вступают в митоз. Появление немеченых митозов отмечено через 32—39 ч (при низком уровне митотичеcкой активности), что свидетельствует о выходе части клеток из периода G₂ после индуцированного фотрином блока. В этот период в препаратах могут обнаруживаться единичные меченые митозы (клетки, задержанные в S периоде).

Таким образом, проспидин практически не влиял на прохождение гепатоцитов гепатэктомировалных мышей по циклу. Некоторое отставание нисходящей части кривой меченых митозов можно рассматривать как результат определенного статмокинетического эффекта, о наличии которого мы писали ранее [3]. Спиробромин, не оказывая цитостатического действия на клетки в  G₂ периоде, длительно задерживает их в фазе синтеза и пострепликативном периоде. Фопурин задерживает прохождение гепатоцитов по всем периодам интерфазы. Наиболее выраженное антимитотическое действие, описанное ранее при введении дипина [4], наблюдалось при воздействии на регенерирующую печень фотрином.

ЛИТЕРАТУРА

1. Wheeler G. P., Bowdn B. J., Adamson D. J., Vail M. H., - Effects of Certain nitrogen mustards upon the Progression of Cultured H. Ep No. 2 Cells through the cell cycle.- Cancer Research, 1970, N 30, p. 100 - 111

2. Barlogie B., Drewinko В. – G₂ block, a Kinetic Effect Common to Chemically Unrelated Cytostatic Agents.- J. Clin. Biol., 1975, 67, 2, p. 2:2OA

3. Изучение антимитотического и кластогенного действия проспидина./Соколова А. С., Урываева И. В., Фактор В. М., Бродский В. Я., Чернов В. А.—Экспериментальная онкология, 1981, 3,.№ 5, с. 37—41.

4. Действие противоопухолевых препаратов дипина и проспидина на клеточный цикл гепатоцитов регенерирующей печени мыши./Фактор В. М., Соколова А. С.. Урываева И. В., Чернов В. А., Бродский В. Я.—Хим.- фарм. ж., 1976, № 10, с.11—16.